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基因編輯動物凈化之——胚胎移植
繁殖出現困難，花費時間金錢制備的小鼠傳不下去了，怎么辦?
動物房疑似污染，小鼠急需凈化到更高級的動物房，怎么凈化?
小伙伴們別擔心!小編教你用胚胎移植的方法解決這個問題!
胚胎移植是目前國際上公認的最有效的生物凈化方法之一。它是一項非常必要的關鍵技術，轉基因、核移植，或體外受精等任何一項操作所生產的胚胎，都必須經過胚胎移植技術才能獲得后代。
一、胚胎移植
即雌鼠超數排卵后，通過體外受精((In Vitro Fertilization, IVF)技術手段獲得受精卵，再將受精卵多次清洗后移植到SPF級假孕母鼠體內，得到后代經微生物檢測合格，完成凈化。
1.超數排卵：向供卵雌鼠腹腔注射PMSG(5IU/只)，48h后腹腔再注射HCG(5IU/只)，使其超數排卵。注射后當天與正常雄鼠同籠交配，次日檢查陰道栓。
2.制備假孕雌鼠：將8周齡的雌鼠與輸精管結扎的雄鼠同籠，使其交配進行假孕誘導。
3.采集受精卵：將見陰道栓的1.5d供卵鼠處死后，在顯微鏡下將輸卵管移入培養(yǎng)液，小心撕開輸卵管后用移卵針收集2-細胞胚胎，再移入mCZB培養(yǎng)液中，37℃，CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.胚胎移植：麻醉假孕同期受體鼠，背中線肋骨處剪一縱切口，找到白色脂肪體并剪開，拉出卵巢、輸卵管、子宮。在體式顯微鏡下找到輸卵管傘口，用移卵針將2-細胞期胚胎從傘口位置移植至輸卵管膨大部中，將卵巢、輸卵管、子宮復位。一般每側移入8-10枚胚胎，最后縫合創(chuàng)口，涂上青霉素和鏈霉素。
二、胚胎移植的應用
1.凈化和快繁
SPF動物一般是經過生物凈化的方式獲得。凈化的主要技術是：體外受精(IVF)+胚胎移植技術。將雄鼠處死后取出精子，將精子激活后與超排的卵母細胞進行體外受精拿到受精卵，再移植到SPF級代孕小鼠的子宮中，這樣可以得到SPF級的小鼠后代。
快速繁育的核心是借助IVF技術短時間獲得大量子代小鼠，其特點是可以減少組內小鼠周齡差異，提高實驗數據的一致性。尤其是基因工程小鼠，通過IVF技術獲得胚胎，再進行胚胎移植后，可一次性獲得大量相同基因型小鼠。
在小鼠進入動物房前，選擇IVF凈化服務，在凈化的同時，還能達到快速繁育的目的，同時獲得更多數目的子代鼠，效率高，縮短繁育周期，極大地加快科研進度。
2.挽救雄鼠不育的品系
單精子顯微注射技術(Intracytoplasmic sperm injection，ICSI)，指使用顯微操作系統(tǒng)將單個精子注射到卵細胞胞漿內，使卵子受精，體外培養(yǎng)到早期胚胎，再移植到代孕小鼠體內發(fā)育成小鼠的技術。該技術用于挽救因精子無活力或者活力低造成雄性不育的小鼠品系。
3.胚胎(精子)的冷凍和復蘇
胚胎(精子)凍存常用于珍貴品系的保種，通過一定的降溫程序及保護措施將胚胎(精子)進行凍存，這種方法可以緩解實驗小鼠空間占有率，降低成本，避免珍貴小鼠品系因外界環(huán)境、疾病等因素造成的死亡或斷代損失。胚胎(精子)復蘇是指通過程序化升溫的方法將凍存的胚胎(精子)解凍，體外培養(yǎng)一段時間后移植到代孕小鼠體內，進而獲得凍存品系小鼠活體的技術。其中，相比于精子凍存復蘇來說，胚胎復蘇后存活率高、移植后懷孕率高的優(yōu)勢，但其冷凍技術受限于專業(yè)機器--程序冷凍儀，建議交給專業(yè)機構來進行。
綜上所述，小鼠的胚胎移植技術是制備基因修飾動物、凈化、保種過程中的必需的、關鍵的技術手段，對于實驗動物學研究及生命科學研究具有重要價值。
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