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基因編輯動(dòng)物凈化之——體外受精
體外受精是基因編輯動(dòng)物凈化中常用的一項(xiàng)技術(shù)操作，但對(duì)于體外受精的各類方法你真的了解嗎?今天小編就帶大家走入體外受精的世界!快來(lái)看看與你所知的體外受精有什么不一樣吧!!
從狹義上講，體外受精是指將動(dòng)物受精過(guò)程中的精卵結(jié)合在體外環(huán)境下完成的一種現(xiàn)象，包括自然條件下的體外受精和人為培養(yǎng)條件下的體外受精。而目前所指的體外受精技術(shù)，即為將哺乳動(dòng)物的精子和卵子置于體外適宜的培養(yǎng)條件下使之完成受精的一種技術(shù)。在生物學(xué)中，把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動(dòng)物稱試管動(dòng)物(test-tube animal)。
從廣義上講，體外受精又包含卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)和受精卵的體外培養(yǎng)兩項(xiàng)密切相關(guān)的技術(shù)。
1.體外受精技術(shù)的基本原理
人工模擬體內(nèi)環(huán)境(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH值等)，使初級(jí)卵母細(xì)胞成熟，同時(shí)使精子獲能，最終完成受精作用，并有計(jì)劃地保存胚胎。
2.體外受精的主要技術(shù)環(huán)節(jié)
?卵母細(xì)胞的獲得和體外成熟、?精子的體外獲能、?成熟卵母細(xì)胞與獲能精子的體外受精、?受精卵的體外培養(yǎng)、?受精卵的移植。
3.卵母細(xì)胞的采集與體成熟特征
卵母細(xì)胞采集
①卵泡抽吸法：用注射器針頭穿刺卵泡而將卵母細(xì)胞抽吸出來(lái)。注射器保持一定負(fù)壓，針頭從卵泡側(cè)面刺入，一次進(jìn)針抽吸卵巢皮質(zhì)多個(gè)卵泡，避免污染。
優(yōu)點(diǎn)：回收速度快，不易造成污染;
缺點(diǎn)：容易損傷卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞。
?、诼雅輨冸x法：用無(wú)菌眼科剪刀或刀片，自卵泡周圍，將周圍組織分離，取下完整的圓形卵泡，放到加油培養(yǎng)液的平皿中，切開(kāi)卵泡，卵泡液帶著卵母細(xì)胞流出。
優(yōu)點(diǎn)：對(duì)卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體的損傷小;
缺點(diǎn)：程序較為復(fù)雜。
③切剖法：用平行排列成組的剃須刀片縱橫切割卵巢，回收液體放在撿胚皿中，37℃培養(yǎng)箱靜止10min，用注射器吸取上清，鏡檢卵母細(xì)胞。
優(yōu)點(diǎn)：回收效率較高;
缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)。
?、苈殉步馄史ǎ河檬中g(shù)刀片將卵巢切為兩半，去掉中間髓質(zhì)部分，露出卵泡，然后用刀片劃破卵泡，在培養(yǎng)液中反復(fù)沖洗，采集其中的卵母細(xì)胞。
優(yōu)點(diǎn)：能保持卵母細(xì)胞周圍卵泡細(xì)胞的完整性，回收率相對(duì)比較高;
缺點(diǎn)：回收速度相對(duì)較慢，容易造成污染。
體成熟特征：
?生發(fā)泡破裂;?染色體凝集;?紡綞體形成;?極體排出;?透明帶軟化;?卵丘細(xì)胞擴(kuò)展。
4.精子制備的方法
卵母細(xì)胞采集
?、賾腋》ǎ焊鶕?jù)精子運(yùn)動(dòng)上游的特性而將高活力的精子與死精子以及其他精漿成分分開(kāi)。將精液置于含有1~1.5ml獲能液或受精液的試管底部，在培養(yǎng)箱中孵育10~30min，吸取上層液體，然后離心洗滌1~2次，即可獲得高活力的潔凈精子。
優(yōu)點(diǎn)：適用于精子活力較差的精液;
缺點(diǎn)：精子的可利用率則大大降低。
?、诓Ａ捱^(guò)濾：采用玻璃柱層過(guò)濾分離，可有效的除去品質(zhì)較差精液中的死精子。
優(yōu)點(diǎn)：制備時(shí)間較短;
缺點(diǎn)：器材來(lái)源和成本較高，未廣泛應(yīng)用。
?、圻呖擅芏忍荻入x心：根據(jù)形態(tài)正常的精子密度高于異常，經(jīng)平衡離心后，形態(tài)正常的精子將聚集于高密度的哌可區(qū)域，從而分離得到高收精力的正常精子。常用哌可密度梯度為30%和45%，平衡離心10min(300g)。
優(yōu)點(diǎn)：可分離高質(zhì)量的精子，且精子的利用率較高;
缺點(diǎn)：精子體外受精結(jié)果受哌可質(zhì)量的影響。
?、茈x心洗滌法：取0.1~0.2ml的精液置于離心管中，然后加入5~10ml的獲能液或受精液，離心5min(300g)，去掉上清液后，再加入5~10ml的獲能液或受精液離心洗滌一次，即可用于受精。
優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單，精子利用率高;
缺點(diǎn)：對(duì)精子沒(méi)有分選作用，不宜用于精子活力差和受精力較低的精液。
以上就是小編整理的體外受精各類方法及其優(yōu)缺點(diǎn)，你決定pick哪個(gè)呢!讓我們?cè)诹粞詤^(qū)見(jiàn)吧!
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